重组大肠杆菌不耐热肠毒素的表达及对小鼠胚胎稳定性的影响     

韩冬梅  仲飞  李秀锦  王淼  李文艳  张峰  潘红丽  谢南  王璐 《兽医大学学报》2012,(10):1478-1483

为研究大肠杆菌不耐热肠毒素（LT）对小鼠胚胎稳定性的影响,运用大肠杆菌表达系统制备了具有生物活性的重组大肠杆菌LT,用重组LT通过腹腔注射处理妊娠小鼠,分析了LT对小鼠胚胎稳定性的影响。首先采用PCR方法从产毒大肠杆菌菌株44815基因组中扩增LT的A、B亚基基因,将其插入到pET-20b（＋）原核表达载体pelB信号肽的下游,分别构建成LTA和LTB分泌型表达载体;将载体分别转化大肠杆菌BL21（DE3）pLysS,在IPTG的诱导下进行表达,利用Ni-NTA琼脂糖凝胶从细菌周质释放液中提取和纯化重组LTA和LTB蛋白;利用细胞毒性试验检测重组蛋白的生物活性。然后用制备的重组LT注射妊娠6d的小鼠,连续注射3d后,统计小鼠的胚胎存活率。同时用ELISA方法检测小鼠血清中与胚胎稳定性密切相关的Th1型细胞因子（IFN-γ、IL-2）和Th2型细胞因子（IL-4、IL-10）及IL-β的表达水平。结果表明,采用分泌性表达策略实现了重组LT在大肠杆菌中的高效分泌表达,LTA和LTB的表达量分别达68、62mg/L。表达的重组LT具有明显的细胞毒性作用;用LT处理妊娠小鼠,胚胎的存活率为32%,明显低于对照组;小鼠血清中Th1型细胞因子IFN-γ和IL-2的含量明显高于对照组（P〈0.01）,分别为对照组的2、3倍。同时细胞因子IL-1β为对照组的2倍（P〈0.01）,而稳定胚胎发育的Th2型细胞因子IL-4、IL-10没有明显变化（P〉0.05）。据此推测,LT可能与大肠杆菌性肠炎引起妊娠家畜流产有关,LT对胚胎稳定性的影响除与LT的直接毒性有关外,可能还与LT介导的免疫调节异常有关。  相似文献   

《国家人权行动计划（2009～2010）》对实现“国家尊重和保障人权”宪法原则的意义     

杨锦芳  肖雯 《云南农业大学学报(自然科学版)》2010,4(3):64-68

2009年4月13日,国务院新闻办公室发布了《国家人权行动计划（2009～2010）》。这是以我国政府名义制定的第一个以保障人权为主题的国家层面规划,是一份政府各部门落实＂国家尊重和保障人权＂的宪法原则,推进中国人权事业发展的行动纲领性质的政策文件。本文拟从介绍《国家人权行动计划（2009～2010）》的出台背景、指导思想、基本原则、主要内容等方面入手,分析该计划出台对实现＂国家尊重和保障人权＂宪法原则的意义。  相似文献   

企业人力资本投资风险的理论分析与对策探讨     

阙春萍  周毕芬 《福建农业大学学报(哲学社会科学版)》2011,(1):57-60

企业是以追逐利润为目的的经济组织,为了提高员工的生产能力,提高经济效益,一般都会对员工进行人力资本投资。企业人力资本投资具有与政府公共人力资本投资和个人人力资本投资不同的特点,主要表现为追逐利润动机明确、出资主体较单一、投资方式较简单、投资风险大。造成企业人力资本投资风险的因素是多方面的,企业必须采取一定的对策措施减少人力资本投资收益的不确定因素,降低投资风险。  相似文献   

淮北狐传染性脑炎混感大肠杆菌的试验研究     

侯宏艳  胡晓苗  张丹俊  赵瑞宏 《安徽农业科学》2012,40(35):17134-17136

[目的]明确淮北狐急性、大量死亡的原因。[方法]结合病死淮北狐的流行病学材料和临床症状,对该狐进行了病理剖检、病毒检测、细菌分离及生化鉴定。[结果]初步判定导致该淮北狐急性、大量死亡的原因为狐狸传染性脑炎混合感染大肠杆菌。对有临床症状的病狐紧急注射康复狐狸的血清和丙种球蛋白,并全群使用经药敏试验筛选的敏感药物治疗大肠杆菌,10 d内基本上控制了疫情。[结论]广大狐狸养殖户应提高警惕,对幼狐进行传染性脑炎病毒的疫苗免疫。  相似文献   

产蛋鹅大肠杆菌的分离鉴定和免疫效果观察     

范才良 《贵州畜牧兽医》2010,34(3):3-4

通过对某养鹅专业户病死产蛋鹅的病原分离,革兰氏染色镜检,生化试验,药敏实验。结果表明:分离菌为大肠杆菌,对头孢噻肟、阿米卡星、壮观霉素等高度敏感,对青霉素、四环素等产生耐药。分离菌制成蜂胶灭活苗免疫该专业户产蛋鹅后,发病率和死亡率明显下降,具有较好的免疫效果。  相似文献   

一株猪源大肠埃希氏菌卡那霉素耐药基因的研究     

赵静 《四川畜牧兽医》2000,27(8):25-26

提取一株猪源大肠埃希氏菌卡那霉素耐药菌株E.coliBJ96147的质粒DNA进行转化，转化子能稳定表达其全部抗生素抗性，表明E.coliBJ96147对卡那霉素（K）、庆大霉（GM）、链霉素（S）、氯霉素（C）、四环素（Tc)、复方新诺明等六种抗生素的抗性由耐药性R质粒介导；根据已发表的编码卡那霉素抗性的磷酸转移酶[APH（3′）-Ⅱ]钝化酶基因的核苷酸序列，设计合成了一对引物P1和P2，用PVR技术检测其钝化酶基因，结果该引物扩增出了预期的578bp大小的PCR产物，淫限制性内切酶HindⅢ进行酶切分析，发现产物被切成二条带，与预出现的389bp及189bp二条带相符，说明PCR可用于检测猪源大肠埃希氏菌卡霉那素磷酸转移酶[APH（3′）-Ⅱ]钝化酶基因。  相似文献   

对FC株猪源性肠毒素型大肠杆菌致病因子的研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

张英  董国雄 《畜牧兽医学报》1990,21(1):67-73

FC菌株是一株从腹泻仔猪粪便中分离的肠毒素型大肠杆菌(Enterotoxigenic E.coli,ETEC)。在MRHA反应中,本菌能凝集人O型、豚鼠、马、绵羊、牛、鸡和兔的红细胞,对人O型和豚鼠红细胞有很高的血凝性,血抗K88和K99血清不能抑制其对豚鼠和绵羊红细胞的血凝。在体外小肠上皮细胞吸附试验中,本菌对仔猪小肠上皮细胞具有强烈的吸附作用;透射电镜和扫描电镜观察证实了FC株菌除表面具有一种纤毛样结构外,还能定居在仔猪小肠段。血清学试验结果表明,本菌的O抗原属于O101。K88和987P两种抗血清均不能凝集本菌,而K99和F41抗血清均可凝集。对纯化的FC株菌粘着素抗原作等电聚焦和聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,结果表明,该菌的粘着素是由等电点分别为4.61和9.78,分子量分别为29500和17500的两种蛋白质抗原所组成。此外,用乳鼠胃内投服试验和兔肠结扎试验证明,该菌只产生热稳定肠毒素。总之,本菌是一株能产生ST的K99,F41的肠毒素型大肠杆菌。  相似文献   

人类活动对湟水流域生态环境的影响   总被引：3，自引：0，他引：3  

李万寿  李晓东 《干旱区研究》1995,(2)

湟水流域属青藏高原同黄土高原的过渡带，是青海省经济、文化最发达的地区，也是近代青藏高原受人为经济活动影响最强烈的地区之一。由于流域的社会经济活动急剧发展，人口剧增，人类活动不断加强和扩大，使这里脆弱的生态环境发生了重大变化，表现为：现代工业的产生，工业污染日趋严重；湟水径流量逐年减少；工业用水比重逐渐增大；水上流失严重；区域小气候环境恶性化；灌区灌排不平衡，地下水位上升；生物种群和数量急剧减少；人口与资源的矛盾日趋尖锐。湟水流域的环境问题提醒我们，在我国生态环境脆弱的西部高原地区，必须高度重视资源和环境的保护，做到人口、经济、资源、环境的协调发展。  相似文献   

华东地区部分猪源大肠杆菌K88黏附素的生物学特性     

陈祥  高崧  王雷  李文杰  曹传闺  焦新安  刘秀梵 《中国兽医学报》2005,25(5):474-477

近年来，从华东地区患腹泻仔猪中分离到一些表达K88菌毛的大肠杆菌，这些菌株只与K88a因子单抗反应，而不与b、c、d因子单抗反应。通过K88常规血清交叉吸收试验、SDS-PAGE、Western印迹，表明这些菌株不仅与K88ac参考菌株C83907制备的c因子血清反应，而且与以分离株SEC586制备且经K88ab、K88ac、K88ad参考菌株吸收后的血清也反应。对分离株SEC586、SEC464的K88主要亚单位结构基因faeG的克隆、测序，发现该基因由846对核苷酸组成，编码菌毛主要亚单位的262个氨基酸及21个氨基酸的信号肽，比国外报道的K88ac FaeG亚单位（263个氨基酸）少了1个氨基酸，比K88ab、K88ad（265个氨基酸）少了3个氨基酸。SEC586、SEC464菌株的FaeG亚单位氨基酸序列的同源性为97．7％，它们与K88ac的同源性为94．7％和96．2％；与K88ab的同源性为90．1％和91．2％；与K88ad的同源性为87．0％和88，6％。结果表明，新分离的K88ac大肠杆菌黏附素主要亚单位已发生了部分变异。  相似文献   

鸡源耐安普霉素大肠杆菌耐药表型研究     

高允乐  张秀英  底佳芳  陶娅 《中国兽药杂志》2005,39(9):9-11

进行了安普霉素耐药大肠杆菌耐药表型的研究.采用常规方法和生化鉴定管对有过安普霉素用药史的鸡场分离的鸡源病原性大肠杆菌进行鉴定,并用试管二倍稀释法测定其最低抑菌浓度(MIC),筛选出鸡源安普霉素耐药大肠杆菌;采用药敏纸片法研究了这些耐药菌对安普霉素等14种抗菌药物的敏感性.共筛选出7株对安普霉素耐药的鸡源性大肠杆菌,这些耐药菌株全部对安普霉素、妥布霉素、奈啶酸、多西环素和阿莫西林耐药;大部分对庆大霉素、链霉素、卡那霉素、壮观霉素也呈现耐药.对新霉素的耐药较低,对阿米卡星高度敏感.部分交叉耐药现象的存在揭示对安普霉素等氨基糖苷类药物产生耐药性的菌株,其他抗生素也可能对它们失去疗效.  相似文献